本发明属于饲料生物技术领域，具体涉及具有高热稳定性的多聚半乳糖醛酸酶突变体T316C/G344C及其基因和应用。通过将氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型多聚半乳糖醛酸酶进行T316C/G344C突变，从而获得所述多聚半乳糖醛酸酶突变体。本发明的多聚半乳糖醛酸酶突变体与野生型多聚半乳糖醛酸酶相比，多聚半乳糖醛酸酶热稳定性增强，70℃处理30min仍保留51.52%左右的活性，而野生酶活性已基本消失。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种编码多聚半乳糖醛酸内切酶的基因及其应用。一种编码多聚半乳糖醛酸内切酶的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的编码多聚半乳糖醛酸内切酶的基因可快速大量地制备获得多聚半乳糖醛酸内切酶或果胶酶，用于多聚半乳糖醛酸内切酶的致病性分析，有利于提高实验效率。
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种酸性外切多聚半乳糖醛酸酶及其制备方法和应用。所述酸性外切多聚半乳糖醛酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。该酶最适pH为3.5、热稳定性好(最适温度70℃，在60、70℃中处理1h都能保持80％以上的酶活)，容易发酵生产。所有这些优点都意味着新发明的外切多聚半乳糖醛酸酶在饲料、食品行业中，将会比以前报道的外切多聚半乳糖醛酸酶更有应用价值。
本发明公开了聚半乳糖醛酸酶优化基因及其表达载体和应用。本发明首先在不改变聚半乳糖醛酸酶氨基酸序列的前提下，综合考虑密码子偏好性，GC含量的变化，密码子适应指数(CAI)，不稳定序列的删除，mRNA二级结构等因素，对聚半乳糖醛酸酶基因进行多种策略的改造，得到3个聚半乳糖醛酸酶优化基因。进一步将上述3个聚半乳糖醛酸酶基因和1个野生型基因转入到毕赤酵母中进行表达，最终筛选出分泌表达量显著提高、酶活力最强的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示的聚半乳糖醛酸酶优化基因。本发明聚半乳糖醛酸酶优化基因所表达的聚半乳糖醛酸酶能有效地降解梨汁中的果胶类物质，提高出汁率和光穿透率，为工业化扩大生产奠定了基础。
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种含有果胶酯酶S6PE-PE和多聚半乳糖醛酸酶S6PE-PG的双结构域杂合酶S6PE-A及其基因和应用。其氨基酸序列如SEQ ID NO.3或5所示。果胶酯酶S6PE-PE、多聚半乳糖醛酸酶S6PE-PG和双结构域杂合酶S6PE-A的最适pH值为5.0，最适温度为50℃；多聚半乳糖醛酸酶S6PE-PG和双结构域杂合酶S6PE-A在40℃下处理60min后剩余多聚半乳糖醛酸酶活性在90%以上；在pH3.0—7.0条件下处理60min后剩余多聚半乳糖醛酸酶活性在65%以上，这说明此酶具有很好的热稳定性和pH稳定性。
